β-半乳糖苷酶试验是中西医执业医师的重要考察内容，以下是实验的重要考点：

　　（1）原理：有的细菌可产生β-半乳糖苷酶，能分解邻-硝基酚-β-D-半乳糖苷（ONPG），而生成黄色的邻-硝基酚，在很低浓度下也可检出。 　　

　　（2）试剂：0.75MONPG溶液：取80mg溶于l5ml蒸馏水中，在加入缓冲液（6.9gNaH2P04溶于45ml蒸馏水中，用30％NaOH调整pH为7.0，再加水至50m1）5ml，置4℃冰箱中保存。0NPG溶液为无色，如出现黄色，则不应再用。 　　

　　（3）方法：从克氏双糖铁培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入一滴甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37℃水浴5min，加入0.25mlONPG试剂，水浴20min～3h观察结果。 　　

　　（4）结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20～30min内显色。 　　

　　（5）应用：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。